一、原理
果汁中的有机酸,用氢氧化钠标准溶液滴定,以酸度计测定终点,用消耗的氢氧化钠标准溶液的体积计算总酸量。又根据氨基酸为两性电解质,氨基酸分子中既含有羧基,又含有氨基,加入甲醛以固定氨基,使溶液显示酸性,再用氢氧化钠标准溶液滴定以酸度计测定终点,根据加入甲醛后氢氧化钠标准溶液的消耗量计算出氨基态氮的含量。
二、仪器设备
(1)酸度计(附磁力搅拌器);(2)玻璃复合电极;(3)电子分析天平,最小称量是0.1mg;(4)滴定管5ml。
三、试剂
(1)所有试剂均使用分析纯;分析用水应符合GB/T6682规定的二级水规格或蒸馏水,使用前应经煮沸、冷却;
(2)0.1 mol/L氢氧化钠标准溶液,按GB/T601配制与标定;
(3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液(临用现配);
(4)0.05mol/L氢氧化钠标准溶液(临用现配);
(5)中性甲醛溶液:在使用前1 h根据中性甲醛溶液的需用量,将甲醛用氢氧化钠溶液调到pH8.4;
(6)pH6.86和pH9.18缓冲溶液。
四、分析步骤
酸度计接通电源,预热30min后,用pH6.86,和pH9.18的缓冲溶液(3.6)校正酸度计。称取混合均匀的果汁2~5g于250ml烧杯中加40~60ml蒸馏水将烧杯置于电磁搅拌器上,插入电极。开动搅拌器,用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液慢慢中和试样中的有机酸,如样品酸度低,用0.01mol/L(或0.05mol/L)氢氧化钠标准溶液滴定,随时观察溶液pH的变化,接近滴定终点时放慢滴定速度,一次滴加半滴(最多一滴),直到酸度计指示pH8.2,即达到滴定终点。记录消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的体积数值(V1)。
将烧杯中的混合液继续滴定到pH8.4,并保持1min不变。然后准确加入10ml中性甲醛溶液(3.5),再用0.1mol/L(或0.05mol/L)氢氧化钠标准溶液滴到pH8.4。记录加入中性甲醛溶液后消耗0.1mol/L(或0.05mol/L)氢氧化钠标准溶液的体积数值(V2)。同一被测样品应同时测定2次。
空白试验:用水代替试样,按以上步骤操作,记录酸度计显示pH8.2时的体积数V01,和加入中性甲醛后,酸度计显示pH8.4后所消耗的体积V02。
五、计算结果
(1)果汁中总酸的含量,按×100计算,式中 X— 果汁中总酸的含量 (g/100g或g/100ml);V1—样品滴定消耗氢氧化钠标准溶液的体积,ml;V01—空白试验消耗氢氧化钠标准溶液的体积(ml);C—氢氧化钠标准溶液的浓度(mol/L);m—样品的质量(g或ml;K—换算果汁中适当酸的系数:苹果酸0.067、柠檬酸0.064、酒石酸0.075。允许差:同一样品同时或连续2次测定结果的相对误差≤±5%,取平均值作为结果,精确到小数点后2位。
(2)果汁中氨基态氮含量,按计算,试中X—果汁中氨基态氮的含量(mg/100g或g/100ml);V2—加入中性甲醛溶液后,滴定试样消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积(ml);V02—空白试验消耗0.05 mol/L氢氧化钠标准溶液的体积(ml);m—样品的质量(g或ml);C—氢氧化钠标准溶液的浓度(mol/L);14—与1ml氢氧化钠标准溶液[C(NaOH)=1.000mol/L]相当的氮的质量(mg)。允许差:同一样品同时或连续2次测定结果的相对误差:氨基态氮≥10mg/100g,≤±2%;氨基态氮<10mg/100g,≤±5%。取2次测定的算术平均值作为结果,精确到小数点后1位。