葛根为豆科植物野葛的干燥根。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其葛根素的含量。
2005版《中国药典》葛根含量测定项下:
- 色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(25:75)为流动相;检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不得低于4000。
2、供试品溶液的制备
取本品粉末约0.1g,用百分之一电子天平精密称定,置锥形瓶中,精密加入30%乙醇50ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
HPLC法测定葛根及其制剂中葛根素的含量时,使用最多的流动相系统为甲醇-水系统,另外还有甲醇-水,加醋酸调节pH等。
3、其他测定
测定心血宁滴丸中葛根素的含量,采用高效液相色谱法,色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(30:2 :65)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长250nm。
测定脑得生片中葛根素的含量,采用高效液相色谱仪色谱柱DiamonsilTM (钻石) C18(200mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-0.1%枸橼酸溶液(5:25:75);紫外检测波长250nm;柱温室温。制备样品溶液时,一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流动相或盐酸溶液等为溶剂,采用超声法提取。
测定葛根冲剂中葛根素含量,采用薄层- 紫外分光光度法,薄层层析硅胶G板,以氯仿-甲醇-水(7:28:0.2)为展开剂,在紫外灯(365nm)下定葛根素位置,刮下斑点,用甲醇洗脱,测定波长为251±1nm。
测定通脉颗粒剂中葛根素及阿魏酸的含量,采用双波长(λ1= 250nm ,λ2=313nm) 梯度洗脱法。高效液相色谱仪色谱柱KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温为30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脱;检测波长为250nm;柱温30℃。