一、叶绿素a
叶绿素是植物体内的绿色色素,可光作用下通过光合作用产生能量。通过测量叶绿素,可间接测量样品中光合作用植物(藻类或浮游植物)的量。
叶绿素 a 色素适用于所有植物种类,而其他叶绿素(如 b,c1,c2,d,f)只适用于一些特定的植物、藻类或蓝藻细菌,可用来指示一些主要藻类团的存在。
二、测量叶绿素a的必要性
营养物(如磷和氮)的流入内陆或沿海的水体,会造成藻类的疯长。随后的腐烂会降低水体中样品的含量,影响鱼类、贝类、甲壳类等生物的生存环境。营养物载荷的变化同样能改变浮游植物总群的构成和多样性。
藻类浓度高说明了水质恶化,浓度低则水质较好。浮游植物的增加会让水变浑浊,影响海草生长和相关的渔场。在一些极端事件中,富营养化会造成缺氧,无氧区会杀死鱼类、贝类和甲壳类生物,会造成有毒有害藻类的爆发。
从水质方面来看,叶绿素a是现有手段中能最佳、最直接的方法,可测量浮游植物数量和质量以及潜在导致水变浑浊和低溶解氧损害。
叶绿素a的单位是μg/L或mg/L,一般认为超过100μg/L的量就会对鱼类产生影响。即使最清洁的水也会含有将近 5μg/L叶绿素 a。针对水体的不同用途和目标,存在一些特定的水质标准。准确来讲可以通过对叶绿素a的检测,来判断水质的具体状况。
三、应用对象
例如拥有地表水蓄水库的自来水厂需要测量叶绿素a来控制水源。通常包括预测和控制藻类爆发或确定避免藻类进入的取水点,以避免过滤系统堵塞、有机负载增加、引起公共健康损害,而必须额外的处理过程。
四、测量说明
将已知量的水样过滤,通常是玻璃纤维过滤器。过滤器需要在丙酮溶液中研磨,然后进行加工和分析。
通常有三种标准方法来测量叶绿素 a:分光光度法(紫外分光光度计)、荧光法(荧光分光光度计)、高效液相色谱法(HPLC)(高效液相色谱仪)。
分光光度法是实验室最常用的方法,样品处理通常只需要 1-5 分钟,一般测量下限是 0.08 mg/L6(用 1cm 比色池),仪器成本也很低。HPLC 能够区分叶绿素的种类和辅助色素,但是测量耗时且技术要求更高,一般要 20-25 分钟来处理样品。1 台 HPLC 的可能可以买 10 台非常好的分光光度计,并且后续的耗材成本也很高。荧光法间接测量叶绿素 a,更适合远程监控。
使用的分光光度计需要较窄的光谱带宽,及多个波长来测量。如三色法使用 750nm(浊度校正)、664nm(叶绿素 a)、647nm(叶绿素 b 校正)和 630nm(叶绿素 c1、c2 校正)。另一个替代方法是在酸化前后用 750、664、665nm 来测量,可校正脱镁叶绿素 a 和浊度的干扰。根据选择的方法来挑选波长和方程。