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高效液相色谱仪常见九大峰相关问题

时间:2016-12-22 10:08:24      阅读:2179

    本文主要介绍高效液相色谱仪常见的有关峰的问题,可能的原因及解决办法。

1、出现肩峰或分叉      

①样品体积过大--用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% ;    

②样品溶剂过强--采用较弱的样品溶剂;    

③柱塌陷或形成短路通道--更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件;      

④柱内烧结不锈钢失效--更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品;    

⑤进样器损坏--更换进样器转子。  

2、出现鬼峰 

①进样阀残余峰--每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗;    

②样品中未知物--处理样品;    

③柱未平衡--重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱);    

④三氟乙酸(TFA)氧化--每天新配,用抗氧化剂 ;    

⑤水污染(反相)--通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水 。  

3、出现峰拖尾 

①柱超载--降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相;    

②峰干扰--清洁样品,调整流动相;

③硅羟基作用--加三乙胺,用碱致钝化柱,增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,纯化样品  ;  

④柱内烧结不锈钢失效--更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 ;    

⑤柱塌陷或形成短路通道--更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件;    

⑥死体积或柱外体积过大--连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 ;  

⑦柱效下降--用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。    

4、使峰位发生重排      

在分析多组分样品时,仅改变流动相的强度(组成百分比)而不改变其组成,一般仅仅改变所有组分的保留时间,不会发生峰位的重排。    

下列条件改变可能发生峰位重排:流动相中换了强溶剂;PH值的改变;柱填料的改变;柱温的改变;流动相的组成改变(如加入离子对试剂三乙基胺等)。

5、出现峰展宽     

①样品体积过大--用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% ;    

②在进样阀中造成峰扩展--进样前后排出气泡以降低扩散  ;  

③数据系统采样速率太慢--设定速率应是每峰大于10点  ;  

④检测器时间常数过大--设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% ;    

⑤流动相粘度过高--增加柱温,采用低粘度流动相;    

⑥检测池体积过大--用小体积池,卸下热交换器;    

⑦保留时间过长--等度洗脱时增加强溶剂含量,也可用梯度洗脱;  

⑧柱外体积过大--将连接管径和连接管长度降至最小;    

⑨样品过载--进小浓度小体积样品 。

6、出现倒峰 

所用的流动相在检测波长下有吸收,而进在此波长下没有吸收或吸收低于流动相的溶液,在流动相中会出现洞穴,通过柱后出现倒峰。    

7、出现“胖”峰和平头峰     

用比流动相强度大的大体积样品进样,通常会损害色谱图的质量,而出现“胖”峰和平头峰。

应遵循下列规则选用溶剂溶解样品:A最好用流动相溶解样品进样。B用大体积弱溶剂溶解样品,如反相色谱中用水溶解样品进样,主要缺点是每次进样后在色谱图的开头出现大的负峰,有时还波及到样品峰。C需要时用强溶剂溶解进样。   

8、前延峰的发生及处理 

因柱温问题很易引起前延峰,有些样品在常温下分离可见前延峰,提高温度后前延峰的现象消失。在离子对色谱中,前延峰的另一个原因是用非流动相作样品溶剂。因此在离子对色谱中要求仅用流动相溶解样品,而且进样量不要太大,否则会导致前延峰或其它问题。在RP-HPLC中样品溶液的强度大于流动相引起前延峰。增加流动相的强度,减少样品溶液的强度,在离子对色谱中增加离子强度,可以克服前延峰的效应。此外使用流动相溶解样品是解决的最简单实用的方法。

9、峰变宽的原因  

A、在使用过程中柱本身退化,逐渐降低柱效。

B、柱外峰宽效应。一根很好的专用柱用于另一液相色谱系统引起塔板数降低,说明新系统有很大的柱外峰宽效应

C、化学效应,多数是流动相和固定相相互作用所致,改变流动相可使宽峰有所改善。

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