本文主要说明高效液相色谱仪的一般操作步骤。
1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10～20分钟。
3、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10mL/min。
6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
7、设计走样方法。点击file，选取select usersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol，一个完整的走样方法需要包括：
a.进样前的稳流，一般2～5分钟；
b.基线归零；
c.进样阀的loading-inject转换；
d.走样时间，随不同的样品而不同。
8、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10、填写登记本，由负责人签字。
在操作时要注意以下事项：
1、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3、所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4、压力不能太大，最好不要超过2000psi。
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