一、超高效液相色谱介绍

超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色谱系统在1996年问世，之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前，超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。

二、超高效液相色谱技术参数

列举部分仪器的个别参数，供参考：

1、泵系统

最大操作压力 15000psi（1mL/min）

流速范围：0.001-2.000mL/min, 增量0.001mL；

流速精度：0.075% RSD；

流速准确度：±0.5%；

梯度准确度：± 0.3%；

梯度精度：0.15%RSD；

压力范围：0-15,000 psi；

真空脱气机：在线真空脱气，六通道均可在线脱气，有自动柱塞清洗和进样针清洗功能。

2、温控自动进样器

进样精度：<0.3%RSD；

进样准确度：±1 μl；

进样线性度：> 0.999；

进样体积：0.1 to 50 μL，增量0.1μL；

样品污染度：<0.004%；

样品温度范围：4°C -40°C，增量：1°C，带制冷功能；

温控稳定性：±0.5℃；

样品盘数：96，384 两种规格；

样品瓶：2mL样品瓶，0.65mL,1.5mL两种规格的离心管。

3、柱温箱

温度范围：室温以上5°C -90°C；

控温精度：±0.1°C；

温度准确性±0.5℃。

二极管阵列检测器：

二极管数：≥1024；

波长范围：190-800 nm；

分辨率：≤1.2 nm；

波长准确度：≤±1nm；

波长精度：≤±0.1nm；

基线噪音：＜±1.0×10-6AU；

基线漂移：＜1×10-4AU/h；

最大采集频率：≥100 Hz；

4、检测器配置 

紫外可见检测器、光电二极管矩阵检测器、蒸发光散射检测器

三、超高效液相色谱解读

UHPLC的标志性特点就是压强高，进样量少，死体积小，流速慢，出峰快。耐压是首要的，然后就是色谱柱了，其次就是仪器系统的整体设计。对UHPLC来说，重点还是流量的精准和耐压，还有就是延迟体积小，响应时间要够快。

而对耐高压系统的评价，一般12000psi可以耐受大部分的试验条件，如果色谱条件更改导致压力再提升，色谱柱的寿命可能会受影响，可能得不偿失。对于绝大多数要进行成本核算的使用者来说。

有多少个方法的流速是需要设置到小数点后第三位的？绝大多数方法的流速是1.0ml/min或者0.8ml/min之类的设置，小数点后两位的精度足够我们用了。目前大多数色谱软件识别色谱峰的保留时间窗都是5%。延迟体积，对于新开发的方法或者方法传递的要求而言，是越小越好。目前各厂家好像都能控制在500ul以下，甚至于100ul以下。

根据检测的样品来定小内径小填料色谱柱的规格。

高灵敏小检测池的检测器，与普通LC检测器相比，检测器的耐压，更高，灵敏度要高几倍。DAD检测器也很有门道，要达到更高的灵敏度和信噪比，目前的潮流是全反射光纤流通池。貌似Agilent的是 TeflonAF管的材质（比金子都贵的材料呀），也有用石英光纤的。Waters的流通池貌似改过几版，老一些UPLC上的是挂在外面的粗棒子，新的放在机箱内了。

在流动相必须用缓冲盐的情况下，部分实验人员更愿意用HPLC。因为用UPLC的时候，对流动相和样品的前处理要求明显要高很多，不然极易堵柱和系统。对于大多数使用者来说，应该都是希望购买的不是最贵的，而是最合适的仪器。

（内容来源液相色谱之家）