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液相色谱仪不同检测器原理介绍

时间:2017-6-1 16:01:35      阅读:1742

液相色谱仪检测器的最早思路,一直是努力去除流动相,来适应气相检测器。但最终发现,液体和气体之间的转化非常麻烦,而且不够稳定。最终调转了方向,发展出了和气相几乎完全不一样的液相检测器技术。

检测器其实就是一个转换器,它把化合物的物理性质或者化学性质,转换成一个和这个理化性质有关的电信号。每一种检测器的使用要求,都和背后的原理有关。

1、紫外检测器

最常见的紫外检测器,就是根据化合物对紫外光的吸收能力,把浓度信息转化为吸光度,再通过光电二极管,把光的信号转化为电信号,然后,被计算机收集和记录。由于紫外吸收能力是一种非常稳定的物理性质,所以紫外检测器也是一种非常稳定的检测器。

在有些标准方法中会使用254nm作为检测波长,那你们有没有想过,为什么是这个数字呢?这和历史的发展有关。在很长一段时间里,紫外检测器中使用的是低压汞灯。而低压汞灯的最大发射波长,也就是汞的原子发射线是253.7nm,四舍五入,就是254nm。也就是说,在这个波长下,灯能量最高,灵敏度最好。然而现在,对于普遍使用氘灯的紫外检测器,254nm其实并没有特别的意义。

现在的分析方法,更多是考虑化合物的最大吸收波长和避开流动相的干扰。紫外检测器对于流动相的要求是不要有紫外吸收的干扰。然而,完全没有紫外吸收的有机溶剂是没有的。所以为了把流动相的干扰降到最小,通常测试波长会避开溶剂的截至波长20nm以上。

气泡的存在也会对吸光度的测定产生干扰,所以预防流通池里产生气泡就很重要。一般的紫外检测器会在出口加一条背压管,产生一点点后压,阻止气泡的形成。

2、示差折光检测器

示差折光检测器RID,原理就是利用物质的折光效应。

折光和密度有关,当化合物进入流通池时,密度可能会比流动相更大,也可能更小。所以示差折光检测器既会出正峰,也可能出负峰。密度受温度的影响特别大,所以示差检测器是所有液相检测器中,对检测器保温要求最高的。另外,不同的流动相比例,密度肯定会不一样,会引起基线的持续变化。因此示差折光检测器不能使用梯度洗脱,只能用等度洗脱。

示差折光检测器在液相分析中的地位,有点像气相的热导检测器,都是利用折光或者热导,这种非常普遍的物理性质来进行检测,通用性好但灵敏度不太好。一般是浓度比较高,或者其他选择性检测器都没有响应的时候,才会使用。

3、荧光检测器

荧光检测器,顾名思义是用来检测能产生荧光效应的物质。

自然界中能发射荧光的化合物是很少的,这既是缺点,更是优点。因为来自于背景中的干扰会很小,灵敏度非常高。荧光检测器对流动相有一个特别的要求,就是要严格脱气。这是由于气泡中的氧气会引发荧光猝灭效应,造成峰面积大幅度下降。

4、蒸发光散射检测器

蒸发光散射检测器ELSD,它利用的物理性质是光散射效应。

空气中的颗粒越多,散射越明显。蒸发光散射检测器通过雾化器等去除溶剂,让化合物形成悬浮的颗粒,就像阳光中漂浮的尘埃。所以它对溶剂是有要求的,不能使用不挥发的盐类,而要用醋酸铵之类的挥发性缓冲盐来替代。从原理上就可以看出,蒸发光散射检测器更适合分子量大的化合物,这样才能形成更明显的散射效应。

(内容来源色谱学堂)

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