一、微量比色皿的种类
1、短光程微量比色皿
此种比色皿的特点是比色池前后壁之间的距离很窄,所以注入的液体量相应变小了,改变两壁间的距离就可相应改变样品体积,已达到节省样品或试剂的效果。
容积一般在100微升左右。
优点是:由于池面受光面积很大,无需进行光斑与池子间的拟合调整,安放到比色池架时很随意,不用顾忌每次插拔比色池的位置的同一性;缺陷是清洗内壁较为困难。
2、通用型微量池
这种微量比色皿的外形尺寸与普通标准池无二异,并且光程L仍保持10mm不变,只是在池子与光轴平行的两侧内壁上粘贴了两块内衬石英(或光学)玻璃已达到减少池子容积的目的,这样改变两块玻璃的厚度便可改变池子的容积。
此种池子的装入样品量大约在0.35~1mL间。
值得一提的是,通用型微量池分为两种类型,主要区别在贴在池子两壁上的内衬玻璃的材料。一种是普通石英(或光学玻璃),其价格较为便宜;另一种是黑石英材料,价格较为昂贵,使用黑石英材料做内衬的池子的优点是:杂散光较少。
使用此种微量池的关键点是:使用前一定要检查入射光斑是否正确地照射到光槽上,如果光斑打偏在内衬玻璃上的话,将会产生很大的噪声。此外由于仪器在制造时,很难保证光轴与比色池架的垂直中心完全吻合,因此光斑难免会偏离微量池的光槽。为了保证光斑完全照射到光槽中,有的仪器在使用通用微量池时往往在池子的前面加装一片遮光板,该遮光板的中央开一条缝隙,该缝隙与微量池的光槽的宽度一致,这样就保证了光斑完全照射到光槽中了。
这种通用型微量池的优点是:普及性很强,基本可以配置在任何分光光度计上。同时,国产池子的价格也不算贵,普遍受到使用者的欢迎。但是该池子与短距离微量池一样有个相同的缺点,那就是清洗时比较麻烦,使用一般的冲洗措施不易彻底洗净池内壁的残留物,必须采用超声波清洗器。
3、专用超微量比色皿
此种比色皿的容积均很小,一般进样量小于50微升,非常适合生物样品及微量萃取样品。这种池子的盛液槽很小且呈水平状,改变容积的方法也是改变池子的光程L,即前后壁的距离。
此种比色皿的优点除了进样量少之外,还有进样便捷和进样量易于控制(使用普通加样枪即可)、清洗方便等特点。美中不足的是,由于使用该类型比色皿时要配备专用的池架,所以其价格较为昂贵。
备注:该池子在使用前,要做微量池、遮光板与光束的拟合,通过透过率或光强度的改变来监控池架的正确位置,这个工作由图中的调整螺钉来完成。
二、为何要使用微量比色皿
1、测试样量稀少
出于种种原因,当被检测的样品量一般少于1mL时,如果仍然按照传统的检测方法(即将样品放入到标准比色皿中检测时),由于入射光束不能照射到或不能完全照射到样品上,所以不能得到正确的检测结果。其原因是:我们经常使用的标准比色皿,规格为10×10mm,容积为4mL。
而入射光束的光斑一般均照射在比色皿的中部,换句话说、如果样品少于1.5mL时,从单色器发出的光束光斑是照射不到样品上去的,何况区区的几百微升的样品呢?因此当样品量少时只能采用微量比色皿。
2、测试样价格昂贵
有的标准试剂或标样的价格很贵,如果配制的测试样品量过大会造成不必要的经济损失。
例如当前比较热门的DNA测试,其标准样品每克的价钱大约1万元人民币。所以使用微量比色皿是势在必行之举。
三、使用微量比色皿的注意事项
1、无论何种微量池,在使用前一定要检查比色池与光斑的拟合状态。这点往往是使用者易于忽略的地方,结果造成测量值的重现性和噪声水平变差。
2、由于微量池内腔体的狭窄,故给清洗工作带来较使用普通池更大的麻烦,这点需要使用者给予充足的重视。
(内容参考仪器信息网)
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