液相色谱法检测含量是液相色谱仪分析工作的重要的一项，液相色谱法检测含量用的基本是外标法和内标法。其中外标法检测的准确性受到更多因素的影响，更需要丰富的经验来避免或减小误差。

首先，我们来看看外标法含量检测的计算公式：

含量=m对*P*A样*V样/（m样*A对*V对）*100%，

其中的任何一项发生了改变，都会使得检测结果发生变化，而这其中的任何一项，都有很多种原因使其发生变化。下面逐一分析。

一、m对/m样——对照品称样量/样品称样量

1、天平是否经过校准，其是否在正常工作状态，称量时天平是否带有静电，是否有空气流动，这些都是影响读数的因素。

2、称量方式采用的是加量法还是减量法，都是很有讲究的。正常情况下，肯定要采用加量法，一次称取到位，这样才能得到准确的称样量。

3、称量操作称量时，是否足够小心，不会在转移样品时使样品撒漏，这个是非常重要的。

4、样品性质。

样品如果具有挥发性，直接称样时，必然会挥发一部分造成误差；另外，如果样品不稳定，或在溶液中不稳定，那么实际上来讲，也是影响了样品量。还有，样品要保证均匀，固体不必说，液体样品要保证是均相，称量之前要摇匀。

5、称样量。

对于万分之一天平，称样量最好能在100mg以上；对于十万分之一的天平，称样量应在10mg以上。

二、P——对照品含量

1、对照品质量对照品是否有合法来源，其含量值是否准确。

2、对照品的保存对照品是否按要求保存，也是至关重要的。因为如果对照品没有按照规定保存，那么其右可能会发生降解，进而影响含量值；另外，如果对照品是保存在冰箱中，称量时，应取出放在干燥器中回至室温再称量，否则其很有可能会吸收空气中的水分，影响含量值。同理，如果对照品引湿性很强的话，长期暴露在空气中，也会使其P发生变化。

三、A样/A对——样品峰面积/对照品峰面积

1、方法的可靠性。

如果所用的分析方法可靠性不好，样品峰面积或保留时间容易变化，那么检测结果也是很重现性不好的。关于方法的可靠性，做过分析方法验证的人应该都能明白，这里包括系统适用性、精密度、准确性和耐用性以及线性等。

2、仪器进样精密度。

这其实可以包括在上述3.1因素中。

3、残留或污染。

如果仪器系统被污染产生残留，而本身峰面积就不大的情况下，这个因素产生的误差就更明显了。

4、积分。

如果样品峰形不够好，或者分离度不够好的情况下，积分就很重要。

四、V样/V对——样品稀释体积/对照品稀释体积

1、容量瓶、移液管等体积是否准确。

一般来说，新买的容量瓶体积是符合要求的，但是也难免会买到个别次品，这就需要进行校验了。

2、容量瓶、移液管规格。

这个是很重要的，一般大家都能注意这个问题，做到合理使用。

3、容量瓶等使用习惯。

容量瓶在使用时，不能使其至于高于40摄氏度的环境下，否则容量瓶会发生变形。

4、定量操作。

这个包括容量瓶和移液管的使用，注意事项一是移液管吸液时，液面不要高刻度太多，放液时千万不要用洗耳球吹，并且尽量保持每次操作时间都一样，粘度大的溶液尤其需要如此。二是观察液面时，要使容量瓶和移液管保持垂直，这时很多人喜欢用三根手指捏住，其实这样不容易保持垂直，最好用两根手指，轻轻捏住就好。三是注意接触容量瓶移液管等的面积越小越好，以免体温加热溶液。

5、温度。

a）如果对照品和样品没有用同一份稀释剂稀释的话，两者就会有差异，受到温度变化的影响也是不一样的。比如，所用的稀释剂为水：甲醇=50：50，对照溶液用的是上次配好的，然后样品用的是新配的，因为水和甲醇混合会放热，其体积也会增大，等到进样时，样品溶液回至室温，体积减小，就会造成检测结果偏高。

b）如果前后室温变化的话，也会造成分析结果的误差。比如，对照溶液进样时，是正常上班时间，实验室开了空调，温度为20℃，而到样品溶液进样时，已经到下班时间了，实验室人员下班时将空调关闭，实验室温度已经降为10℃，这时样品溶液浓度肯定也会增大。

c）由于对照品相对比较贵重，一般实验室都会保存一段时间。如果下次分析时没有回至室温，或此时室温与对照品溶液配制时的温度已经发生了明显的变化，都会造成分析结果的误差。

d）有些人配好样品后，喜欢用手去握着容量瓶，细心观察的就会发现一会之后液面就明显高于刻度。如果操作者没有注意这点，有的样品立即进样，有的排队过了一会再进样，就会造成误差。

以上所述的，稀释剂为纯有机溶剂或有机溶剂比例很高的情况下，误差更明显，而这些往往容易被忽视。

（内容来源液相色谱之家）