淫羊藿为小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鲜淫羊藿的干燥地上部分。淫羊藿具有延缓衰老、降血压,降血糖,降血脂的功效,可以改善脑缺血缺氧、降低血液黏度、抑制体外血栓形成、刺激骨髓DNA的合成、增加外周血白细胞及骨髓造血干细胞的数量、提高免疫力、促进骨骼生长、预防骨质疏松、抗炎,抗病毒,抗肿瘤、对抗抗癌药物的副作用。
2005版《中国药典》一部收载的含量测定方法,一要是采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,二是采用高效液相色谱法测定其淫羊藿苷的含量。有关淫羊藿及其制剂中淫羊藿苷的含量测定方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法等。下面是高效液相色谱法的说明。
2005版《中国药典》淫羊藿含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(30:70)为流动相;检测波长为207nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不得低于1500。
供试品溶液的制备:取本品叶片粉末约0.2g,用十分之一天平精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇20m,称定重量,超声处理1小时,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
HPLC法主要的流动相系统有:乙腈-水系统、乙腈-磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液。
样品溶液一般以甲醇、稀乙醇为提取溶剂,净化处理一般用聚酰胺柱或C18小柱处理;也有用正丁醇-碳酸氢钠、乙醚-醋酸乙酯等试剂萃取。
另外,复方骨宝片中有效成分淫羊藿苷含量测定也使用高效液相色谱测定法。采用高效液相色谱仪色谱柱Shimpack ODS (4.6mm×250mm, 5Lm);流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液(32:68);检测波长为254nm;柱温30℃。
测定淫羊藿药材中淫羊藿苷的含量也可以采用薄层色谱-荧光分光光度法。采用荧光分光光度计;硅胶G硅胶G加0.1mol/L Na2HPO4的羧甲基纤维素钠溶液自制板;以醋酸丁酯-甲酸-水(1.3:1:1)在10℃以下放置后的上层溶液作为展开剂;显色剂:10% AlCl3甲醇溶液;在Ex=430nm,Em =480nm条件下测定荧光强度。药材用70%乙醇水浴回流提取。
测定骨松宝颗粒中淫藿苷类化合物的含量采用一阶导数光谱法。用UV紫外可见分光光度计。样品供试液制备方法:骨松宝颗粒→除去包装→加入70%乙醇,60℃水浴中加热提取→用60℃水超声振荡提取→静置过夜→用70%乙醇补足重量→上取聚酰胺柱→先用30ml蒸馏水洗脱,弃去洗脱液→再用70%乙醇洗脱,收集乙醇液,定容于50ml 的容量瓶中,即为样品供试液。在200~400nm范围内自动扫描(△λ= 2nm),以一阶导数峰~谷法(262~276nm) 的振幅值(D)为定量依据测定含量。