分光光度计使用一段时间后,一般都会存在一定的波长误差。误差较小时只需调整波长刻度盘或波长计数器,就能使误差减小到合格范围内;当波长误差较大时,则不能再简单地运用上述方法进行调整。对于不同类型的分光光度计,由于单色器色散特性的不同,误差校准方法也有较大的区别。
在棱镜型仪器波长的长波区和短波区,棱镜变化同样位置时,仪器长波区的波长变化值将大于短波区的波长变化值,即在调整仪器的波长校准螺丝时,引起仪器波长变化的情况是非线性的。例如当调波长校准螺丝使仪器650nm处变化(7~8)nm时,此时仪器400nm处只会变化1nm左右。利用这一特性,当仪器出现较大的非线性误差时,就能将仪器波长误差准确而迅速地调整到合格范围内。
光栅的色散特性是线性的,光栅型仪器的波长误差一般也是线性的,波长误差的调整方法较为简单,这里不作介绍。下面详细介绍棱镜型仪器波长误差的调整方法。
1、短波区是负误差,长波区是正误差时的调整
例如:某721型仪器短波区用标准值为430.0nm的标准干涉滤光片检定,Δλ1=-6nm。长波区用标准值为683.0nm的标准干涉滤光片检定,Δλ2=10nm。打开仪器的上部盖板,松开波长盘上的3个固定螺丝,将刻度盘向高波长方向移|Δλ1|-1=|-6|-1=5nm(注意:此时波长盘不能动,只是移动波长刻度盘位置)。即原波长指示为440.0nm,移动波长刻度盘后指示为445.0nm。然后紧固刻度盘上的3个螺丝,将仪器调到长波区标准滤光片的标准值683.0nm处。将683.0nm干涉滤光片放入光路,反时针调仪器左边的波长校准螺丝,使仪器透射比为最大。再将430.0nm干涉滤光片放入光路,检查仪器短波区波长误差情况,若还是负误差,再用上述方法继续调整;若是正误差,按下述方法2继续调整。
2、短波区是正误差,长波区是负误差时的调整
例如:某721型仪器用上述干涉滤光片检定后,Δλ1=7.0nm,Δλ2=-8.0nm。此时将仪器波长刻度盘向低波长方向移Δλ1-1=7-1=6nm,并紧固刻度盘。再将仪器波长调到683.0nm处,将683.0干涉滤光片放入光路,顺时调仪器波长校准螺丝,使仪器透射比为最大,其他同方法1。
用方法1或方法2将仪器高低端波长误差减小到±1nm后,(500~600)nm之间的波长误差将不会很大。该方法适用于各种棱镜型紫外分光光度计和可见分光光度计,使用者可根据平时的调修经验参考使用。