一、液相色谱仪色谱柱的安装
标准操作规程(SOP)应为:取A管路放入流动相瓶中→ 拧松泵头 → 流速由0ml/min逐渐升至10ml/min,观察尾液是否呈瀑布状流出(持续10秒) → 拧紧泵头 → 流动相呈抛射状从安装色谱柱的一端喷出(观测是否呈抛物线状,持续5秒) → 流速逐步降至1.0ml/min →安装色谱柱,待20秒后,流动相从色谱柱另一端呈泉水状涌出再安装另一端→ 手握两端螺丝帽,拧紧。
以上安装顺序遵循的是:逐级排放气泡和仪器内存留的洗液。
二、试验后色谱柱的清洗
1、C8柱、C18柱的清洗
液相色谱仪最为常用的C8柱、C18柱。
当流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时,流速1.0ml/min冲洗30min,,柱温保持实验时的温度。
水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时,先采用纯水(或含有2%甲醇),冲洗A管路(实验中采用的管路),时间30min(如流动相中有表面活性剂,则适当增加时间),流速1.0ml/min,柱温可较实验温度高出5~10℃。随后更换成20%甲醇再冲洗30min,流速不变,柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。
实践证明没必要采用高比例的甲醇冲洗,因为残余有机相中的水相遇到高比例甲醇后在泵头上、色谱柱中会析出少量盐和表面活性剂,导致色谱柱寿命缩短。
2、其他类型的色谱柱
对于不经常使用的色谱柱类型,最好先查询使用、清洗、保存的方法,不能凭感觉操作,否则易造成色谱柱性能急剧下降的后果。
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