色谱柱是装填有固定相用以分离混合组分的柱管。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。可分为填充柱和开管柱两大类。液相色谱通常均采用填充柱。由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。
单抗类蛋白药是非均一性的结构复杂的大分子,与传统小分子药不同,因此使这类原研药或仿制药的研发与质控工作难度增大。通过液相色谱-质谱联用技术(LC/MS),结合蛋白分子量的测定、异构体、氨基酸修饰、糖基化修饰以及聚集情况分析等多种检测手段,可对单抗类药物进行全面的结构表征。
首先要对针对单抗药物的各项物化性质和功能性指标进行对比分析试验。利用尺寸排阻色谱法(SEC)的分子空间结构不同的原理可对抗体的多聚体、抗体片段以及PEG蛋白等进行有效分析。其中,对原研和仿制药样品的非均一性分析(抗体聚集情况分析)时使用了色谱柱。
硼酸盐亲和色谱法多用于对糖或糖蛋白等生物分子进行分离。可以使用亲和色谱柱对样品中糖基化和未糖基化的抗体异构体进行分离。
在通过N-糖苷酶F来释放单克隆抗体Fc部分上的糖链,并对游离的N-末端糖链进行2-AB荧光标记后进行糖基化分析的过程中使用到了色谱柱用来分离2-AB标记的糖链。亲水相互作用(HILIC)色谱柱适用于亲水性低分子、核酸以及糖类等化合物的分离分析。在单抗药物分析应用上,常用来分析结合在抗体上的糖链的结构差异性。